Xénodiagnostic pour détecter l’infection à Borrelia burgdorferi: une première étude chez l’homme

Contexte Des études chez l’animal suggèrent que Borrelia burgdorferi, l’agent de la maladie de Lyme, peut persister après un traitement antibiotique et peut être détecté par divers moyens dont le xénodiagnostic utilisant le vecteur tique naturel Ixodes scapularis Aucune preuve convaincante n’existe pour la persistance des spirochètes viables. Nous avons déterminé l’innocuité de l’utilisation des larves d’I scapularis pour le diagnostic de l’infection à B. burgdorferi chez l’homme. Méthodes Les tiques larvaires I scapulaires ont été placées sur des sujets et nourries à la réplication. Les tiques ont été testées par PCR en chaîne par polymérase. culture, et / ou amplification isotherme suivie par PCR et spectroscopie de masse par ionisation par électrospray En outre, des tentatives ont été faites pour infecter des souris immunodéficientes par piqûre de tique ou inoculation de tiques. Xénodiagnostic a été répété chez des individusRésultats Xenodiagnostic a été bien toléré sans effets indésirables graves. Le diagnostic de Xenodi était négatif chez les patients présentant un post-traitement du syndrome de Lyme PTLDS et / ou des taux élevés d’anticorps C et chez les patients après un traitement antibiotique pour érythème migrant Xenodiagnosis était positif pour l’ADN de B burgdorferi chez un patient avec erythema migrans au début du traitement et chez un patient atteint de PTLDS Il n’y a pas suffisamment de preuves pour conclure à la présence de spirochètes viables chez l’un ou l’autre patient. Conclusions Le xénodiagnostic utilisant des larves d’Ixodes scapularis était sûr et bien toléré D’autres études sont nécessaires pour déterminer la sensibilité du xénodiagnostic chez les patients avec la maladie de Lyme et la signification d’un résultat positifEnregistrement des essais cliniques NCT

xénodiagnostic, Ixodes scapularis, maladie de Lyme, Borrelia burgdorferi, humainVoir le commentaire éditorial de Bockenstedt et Radolf sur les pages «La maladie de Lyme, causée par Borrelia burgdorferi et transmise par les tiques d’Ixodes, est la maladie transmise par les tiques la plus répandue aux États-Unis et en Europe. ] Borrelia burgdorferi pénètre dans la peau au site de la piqûre de tique, entraînant typiquement l’érythème migrans EM lésion cutanée Du site d’inoculation, l’organisme peut disséminer et affecter le cœur, les articulations et le système nerveux central. Une minorité de patients présenteront des symptômes non objectifs persistants ou récurrents, par exemple, fatigue, douleurs musculo-squelettiques et troubles cognitifs, appelés syndrome de Lyme après le traitement recommandé par antibiotique. La pathogénèse du PTLDS demeure un domaine de prédilection. Grande controverse Les preuves de l’infection en cours n’ont pas été trouvées en utilisant la réaction en chaîne par polymérase PCR ou c Les essais randomisés contrôlés contre placebo n’ont pas montré de bénéfice significatif et durable du retraitement par antibiothérapie chez les patients atteints de PTLDS Des données récentes sur des animaux suggèrent que l’éradication de B burgdorferi par les antibiotiques peuvent être incomplets Des études chez le chien, la souris et le singe ont montré que l’ADN de B burgdorferi peut être détecté dans les tissus jusqu’à plusieurs mois après l’antibiothérapie Xenodiagnosis, l’utilisation d’un vecteur pour détecter la présence d’un organisme utilisé pour détecter B burgdorferi dans les études animales Ixodes tiques nourries sur des souris et des singes traités par antibiotiques ont été capables d’acquérir B burgdorferi, comme démontré par PCR de la tique et, chez certaines souris, transmission aux souris immunodéficientes repas Cependant, certaines des études animales ont eu des préoccupations méthodologiques , y compris l’infection par inoculation à l’aiguille au lieu de la transmission des tiques, l’utilisation de f des inoculums à forte dose de spirochètes en culture, et incapacité à reproduire la pharmacocinétique de l’antibiotique et l’exposition attendue chez l’homme; et, par leur nature même, ont une généralisation limitée à la maladie humaine. Ici, nous présentons les résultats de la première étude de l’utilisation des larves I scapularis pour le xénodiagnostic de l’infection à B burgdorferi chez les humains

Méthodes

Protocole d’étude

Le consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les participants L’étude a été approuvée par le comité d’examen institutionnel de chaque centre et a été menée conformément aux lignes directrices sur les bonnes pratiques cliniques et à une exemption d’appareil expérimental approuvée par la Food and Drug Administration. Les volontaires sains résidaient dans les zones endémiques du Maryland et du Massachusetts, n’avaient pas d’antécédents de maladie de Lyme et étaient séronégatifs par immuno-enzymatique. Les patients du groupe EM post-traitement ont reçu un diagnostic d’EM par un médecin et ont suivi l’antibiothérapie recommandée entre et plusieurs mois avant le début du traitement. inscription Subjec ts inscrits dans le groupe d’anticorps C élevé avait la maladie de Lyme , a reçu le traitement recommandé , et avait un index d’anticorps C & gt; pendant au moins des mois après l’achèvement du traitement Les sujets atteints de PTLDS avaient la maladie de Lyme , avaient reçu un minimum de traitement recommandé , et présentaient des symptômes non spécifiques persistants qui coïncidaient avec l’apparition de la maladie de Lyme. une réduction des activités Les sujets des groupes à forte concentration d’anticorps anti-C et de PTLDS n’auraient pas pu recevoir d’antibiotiques dans les mois suivant l’inscription.

Étudier le design

Les sujets avaient – des tiques larvaires I scapularis exemptes d’agents pathogènes Annexe supplémentaire placé sur une zone de -cm sous un pansement de rétention modifié Le Flap, Monarch Labs, Irvine, Californie; Figure Lorsque possible, une zone où la maladie a été observée Le site EM, près d’une articulation affectée a été sélectionné Des tiques ont été prélevées – jours après la mise en place Des biopsies cutanées de 2 mm ont été réalisées sur les sites exacts d’alimentation des tiques. les tiques engorgées ont été récupérées, les individus pourraient répéter la procédure s’ils rencontraient encore les critères d’entrée Une procédure répétée a également été offerte aux personnes ayant un résultat de xénodiagnostic positif

Figure Vue grandDownload slideDressing utilisé pour le xénodiagnostic Le panneau de gauche représente le pansement LeFlap avec des tiques non nourries placées sur l’avant-bras d’un sujet Le panneau de droite montre les tiques d’alimentation jointesFigure View largeDownload slideDressing utilisé pour le xénodiagnostic Le panneau de gauche représente le pansement LeFlap avec des tiques l’avant-bras d’un sujet Le panneau de droite montre les tiques d’alimentation jointes. Les participants ont rempli une fiche du journal pour le premier mois et les évaluations ont été effectuées au jour, au mois et au mois après l’élimination des tiques. et les expériences défavorables pédiatriques

Test de tiques xénodiagnostiques

Au protocole, des tiques vivantes ont été conservées dans une chambre humidifiée. Environ semaines après la mue, les tiques nymphales ont été nourries avec des souris SCID à immunodéficience combinée sévère CH / HeN. Des tiques remplacées ont été analysées. infection par PCR et culture Des souris SCID ont été surveillées pour l’infection par culture et PCR de biopsies d’oreilles après plusieurs semaines après l’alimentation des tiques, et plusieurs semaines par culture et PCR des tissus de la peau, de la cheville, du coeur et de la vessie. protocole a été utilisé après la procédure de xénodiagnostic Les tiques récupérées ont été conservées dans une chambre humidifiée pendant des jours. Les tiques ont été broyées et testées par PCR et injection du lysat par voie sous-cutanée dans une souris SCID et / ou par amplification isotherme suivie de PCR et spectroscopie de masse. IA / PCR / ESI-MS Annexe Biopsies cutanées ont été testées par culture et culture PCR Di rectal IA / PCR / ESI-MS a été réalisée dans la biopsie cutanée de sujetsXenodiagnostic a été considéré comme positif lorsque l’une des techniques a démontré B burgdorferi ou son ADN dans une tique xénodiagnostique ou dans les tissus des souris SCID injecté avec lysat de tique ou alimenté par tiques nymphaLes infections de la souris, de la PCR et de la souris SCID ont été réalisées au Tufts Medical Center Les investigateurs n’ont pas été aveuglés au statut du groupe de participants Les tests IA / PCR / ESI-MS ont été réalisés chez Ibis Biosciences sans connaissance du statut du groupe de participants

RÉSULTATS

Caractéristiques du sujet

Les sujets ayant participé au xénodiagnostic comprenaient des patients ayant des taux élevés d’anticorps anti-C, des patients atteints de PTLDS, des patients atteints d’EM après la fin d’un traitement antibiotique, des patients sous EM en thérapie, et bénévoles en bonne santé Tableau Tous les patients ont contracté l’infection dans l’est des États-Unis. Sept patients ont eu un & gt; Procédure de xénodiagnostic Il s’agissait d’individus du groupe C élevé, d’un individu du groupe PTLDS et de l’individu avec EM mois après l’achèvement de l’antibiothérapie.

Tableau Participant Groupe d’identification des données démographiques États-Unis Où patient Infection acquise Maladie de Lyme Temps de présentation de l’infection soupçonnée au traitement, d Temps du diagnostic au traitement, d Temps du diagnostic à la procédure, Nombre de traitements, IV / Indice C oral IgG WB IgM WB Symptômes présents dans le mois précédant l’inscriptionb A EM EM EM / / / D B EM EM CTx EM / / B EM EM WV MEM / / / D B EM EM WV MEM / / / D B EM EM MD MD EM / / / B- EM PTx MA EM / / / B, D C- élevé C VA EM / / / B, D C- élevé C MD Arthrite / / / C C- élevé C MD MEM, FP / / / B , D, I, N C- élevé C MD FP, méningite / / / F, G C- élevé C VA EM, arthrite / / / B, D, G, K, L, N C- élevé C MD Arthrite / / / A, B, D, M, N C- Arthrite à CMC élevée / / / C- CMC élevé MEM / / / B, C, D, F, I, K, L, M, N C- Haut C MA ou NJ NB, arthrite / / / B, D, M, N C- C élevé EM EM / / / D- PTLDS CT EM / / / A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N D- PTLDS MD Arthrite / / / B, D, F, G, H, I, K, L, M, N D- PTLDS VA FP / / / B, D, F, M, N D- PTLDS MA EM / / / B, D, M, N D- PTLDS MA EM / / / D, M, N D- PTLDS MA EM / / / D , M, N D- PTLDS MA arthrite / / / B D- PTLDS MA EM, l’arthrite / / / B, D, F, M, N D- PTLDS PA EM, l’arthrite / / / B, D, F, G, I, K, L, M, N D-PTLDS MA PN / / / B, D, G, I, K ID Groupe États-Unis Où patient Infection acquise Maladie de Lyme Temps de présentation de l’infection soupçonnée au traitement, d Temps du diagnostic au traitement , d Temps écoulé entre le diagnostic et la procédure, d Nombre de traitements, IV / Indice oral C IgG WB IgM WB Symptômes présents dans le mois précédant l’inscriptionb A- EM MA EM / / / D B- EM PTx CT EM / / / B- EM PTx WV MEM / / / D B- EM PTx WV MEM / / / D B- EM PTx MD EM / / / B- EM PTx MA EM / / / B, D C- élevée C VA EM / / / B, D C- élevée C MD Arthrite / / / C C- élevée C MD MEM, FP / / / B, D, I, N C- élevée C MD FP, méningite / / / F, G C- élevée C VA EM, arthrite / / / B, D, G, K, L, N C- élevée C MD Arthrite / / / A, B, D, M, N C – Fort C MD Arthrite / / / C- Haut C MD MEM / / / B, C, D, F, I, K, L, M, N C- C élevé MA ou NJ NB, arthrite / / / B, D , M, N C- C élevé EM EM / / / D- PTLDS CT EM / / / A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N D- PTLDS MD Arthrite / / / B, D, F, G, H, I, K, L, M, N D- PTLDS VA PF / / / B, D, F, M, N D- PTLDS MA EM / / / B, D, M, N D- PTLDS MA EM / / / D, M, N D- PTLDS MA EM / / / D, M, N D- PTLDS MA arthrite / / / B D- PTLDS MA EM, l’arthrite / / / B, D, F, M, N D- PTLDS PA EM, l’arthrite / / / B, D, F, G, I, K, L, M, N D- PTLDS MA PN / / / B, D, G, I, K Abréviations: résultats de transfert de Western C, IgG et IgM à l’entrée de l’étude; EM, érythème migrant; EM PTx, après l’achèvement de l’antibiothérapie pour l’érythème migrant; FP, paralysie faciale; IgG, immunoglobuline G; IgM, immunoglobuline M; IV, par voie intraveineuse; MEM, érythème migrant multiple; NB, neuroborréliose; PN, neuropathie périphérique; PTLDS, syndrome post-traitement de la maladie de Lyme; WB, Western blota CT, Connecticut; MA, Massachusetts; MD, Maryland; NJ, New Jersey; PA, Pennsylvanie; VA, Virginie; WV, West Virginiab A, diminution de l’appétit; B, arthralgie; C, toux; D, fatigue; E, fièvres; F, maux de tête; G, le cou raide; H, douleur abdominale; Moi, la myalgie; J, nausée; K, picotement; L, engourdissement; M, difficulté à se concentrer; N, troubles de la mémoireVoir les patients Les patients du groupe C élevé ont reçu une médiane d’années après leur diagnostic initial et ont reçu une médiane de traitement antibiotique. La manifestation la plus fréquente chez les patients à forte C était l’arthrite de Lyme. après leur diagnostic initial et reçu une médiane de cours d’antibiotiques Trois des individus avaient reçu une antibiothérapie intraveineuse La manifestation initiale la plus fréquente de la maladie de Lyme chez les patients PTLDS était EM Tableau Les symptômes les plus courants à l’inscription étaient la fatigue, la concentration, les troubles de mémoire, et arthralgies Huit des patients avaient encore des titres d’anticorps C élevés et / ou une immunoglobuline G de la maladie de Lyme.

Procédure de placement de tiques

Comme aucun protocole de xénodiagnostic de larves d’I scapularis chez l’homme n’avait existé auparavant, nous avons développé un pansement de rétention utilisant le pansement Le Flap, modifié pour utilisation avec les tiques. Les sujets inscrits au début de l’essai avaient moins de tiques en raison du piégeage des tiques. Après l’ajout d’un anneau de mousse pour créer une barrière entre les tiques et l’adhésif, nous avons réussi à obtenir entre% et% de tiques pour nourrir avec succès Figure montre le pansement utilisé et les images avant et après xénodiagnostic Tiques larvaires requises – jours à nourrir à réplétion , moyenne, jours [plage, – jours]

Événements indésirables

Xénodiagnostic a été bien toléré Tableau Tous les sujets ont complété avec succès le placement des tiques et il n’y a pas eu de retrait au cours de l’étude. L’événement indésirable le plus fréquent était un léger démangeaison sur le site, observé en% des sujets avec une durée médiane du xénodiagnostic. procédure a été également bien toléré, avec des démangeaisons légères sur le site étant la plainte la plus fréquente Il n’y avait pas d’événements indésirables graves associés à la procédure

Tableau Effets indésirables Événements indésirables Nombre d’épisodes Démangeaisons au site de xénodiagnostic Épisodes chez des sujets Démangeaisons liées aux épisodes de pansement chez des sujets Démangeaisons cutanées Perforations au site Episodes chez des sujets Érythème au site de biopsie de perforation cutanée Épisodes chez des sujets Infections respiratoires supérieures chez des sujets Maux de tête épisodes chez les sujets nausées légères sans cause apparente épisodes chez les sujets Effets indésirables Nombre d’épisodes démangeaisons au site de xénodiagnostic épisodes chez les sujets démangeaisons liées aux épisodes de pansement chez les sujets démangeaisons à la peau punch biopsie épisodes du site chez les sujets érythème à la peau poinçon biopsie épisodes dans sujets Épisodes d’infection respiratoire supérieure chez les sujets Épisodes de maux de tête chez les sujets Nausées légères sans apparition apparente épisodes chez les sujets Effets indésirables survenus dans & gt; Les épisodes de légers symptômes des voies respiratoires supérieures chez les individus Huit épisodes de maux de tête chez les sujets Deux épisodes ont été classés comme modérés et graves et se sont produits plusieurs mois après l’intervention. Tous les sujets avaient des antécédents de récurrence. maux de tête

Test de tiques xénodiagnostiques

Un total de tiques engorgées ou partiellement engorgé a été récupéré chez les sujets initiaux et traité en utilisant le protocole, qui comprenait la mue et l’alimentation des nymphes sur des souris SCID De ces tiques, des tiques ont mué aux nymphes et des nymphes ont été placées sur des souris SCID se nourrissant de souris SCID Les participants au Tableau Quatre n’ont pas récupéré de tiques nourries ou partiellement nourries, et les participants n’ont pas testé de tiques xénodiagnostiques en raison d’une perte pendant la mue ou l’alimentation des souris SCID.

Tableau Résultats du test de détection du xénodiagnostic Numéro de groupe Protocole de tiques de la Fed testées par PCR / culture Nombre de tiques positives Nombre de larves nourries et partiellement nourries testées par IA / PCR / ESI-MS Nombre de résultats positifs IA / PCR / ESI-MS EM A – EM PTxa ND ND EM PTx B- SO SO SO EM PTx B- SO SO EM PTx B- SO SO SO PTx B- SO SO SO EM PTx B- Élevé C C- N / D N / D N / D Élevé C C- N / D N / D Élevé C CR ND ND Élevé C C- N / D N / D Élevé C CR ND ND Élevé C- N / D N / A Élevé C CR ND ND Élevé C C- N / D N / D Élevé C C- N / D N / D N / D Élevé C CR ND ND Élevé C C- N / D N / D N / A Élevé C CR ND ND Élevé C C- ND ND Élevé C C- ND ND Élevé C C- ND ND PTLDS D- S / O S / O S / O PTLDS D- S / O S / O PTLDS DR PTLDS D – SO SO SO PTLDS D- SO SO SO PTLDS D- ND ND PTLDS D- N D ND PTLDS D- ND ND PTLDS D- PTLDS D- ND ND PTLDS D- HV F- N / D N / D N / D HV F- N / D N / D HV F- N / D N / D N / A A HV E / N / A N / A HV E- N / D N / D N / D HV E- N / D N / D N / D HV E- N / D N / D HV E- N / A N / A N / A HV E- HV E- ID de groupe Protocole Nbre de tiques de la Fed testées par PCR / Culture Nombre de tiques positives Nbre de larves nourries et partiellement nourries Testées par IA / PCR / ESI-MS N ° de IA / PCR / ESI -MS Positifs Résultats EM A- EM PTxa AR ND ND EM PTx B- N / D N / D N / A EM PTx B- N / D N / A EM PTx B- N / A N / A EM PTx B- N / A so EM PTx B- Élevé C C- N / D N / D N / D Élevé C C- N / D N / D Élevé C CR ND ND Élevé C C- N / D N / A Élevé C CR ND ND Haute C C- N / A N / A Élevée C CR ND ND Élevée C C- N / D N / A Élevée C C- N / D N / D N / D Élevée C CR ND ND Élevée C- N / D N / D N / D Élevé C CR ND ND Élevé C C- ND ND Élevé C C- ND ND Élevé C C- ND ND PTLDS D- N / D N / D N / D PTLDS D- N / A SO PTLDS DR PTLDS D- SO SO SO SO PTLDS D- SO SO PTLDS D- ND ND PTLDS D- ND ND PTLDS D- ND ND PTLDS D- PTLDS D- ND ND PTLDS D- HV E- N / D N / D N / D HV E- N / D N / D HV E- N / D N / D N / D HV E- N / D N / D HV E- N / A N / A N / D HV E- N / D N / D N / D HV E- N / D N / D HV E- N / D N / D N / D HV E- HV E- Abréviations: EM, érythème migrans; EM PTx, après l’achèvement de l’antibiothérapie pour l’érythème migrant; C élevé, sujets avec des taux sériques d’anticorps C constamment élevés; HV, volontaires sains; IA / PCR / ESI-MS, amplification isotherme suivie d’une réaction de polymérisation en chaîne et d’une spectroscopie de masse par ionisation par électrospray; N / A, non applicable; ND, pas fait; PCR, amplification en chaîne par polymérase; PTLDS, syndrome post-traitement de la maladie de Lyme; R, répéter la procédure de xénodiagnostic La procédure a été répétée des mois après l’achèvement de l’antibiothérapie et le patient était asymptomatique. Les tiques nymphales ont été testées par PCR et la culture dans le protocole; les tiques larvaires ont été testées dans le protocole Le test direct des tiques par IA / PCR / ESI-MS a été réalisé uniquement selon le protocole Les tiques individuelles ont été évaluées uniquement par les méthodesVoir grand Suite à la perte des tiques durant la mue et l’alimentation des souris SCID Pour le protocole, toutes les tiques ont été testées après une incubation de jour pour permettre la réplication de toutes les tiques B burgdorferi acquises ont été testées par culture, PCR, injection de lysats dans des souris SCID avec culture subséquente et PCR et / ou IA / PCR / ESI-MS Parmi les sujets, les tiques ont été testées par PCR et culture; et chez les individus, les tiques ont été testées directement par IA / PCR / ESI-MS Pour les individus, les tiques ont été testées à la fois par PCR et culture et IA / PCR / ESI-MS Table des tiques de volontaires sains testés par protocole et étaient négatifs. De ces sujets, testés négatifs Des résultats indéterminés ont été obtenus chez des patients, attribués à une contamination en laboratoire. Tous les tissus de souris SCID qui avaient été nourris par le protocole nymphes ou ont été injectés avec lysat provenant du protocole des tiques récupérées testé négatif par PCR et tableau de culture

Tableau Résultats des tests d’immunodéficience chez les souris soumises au test d’immunodéficience sévère Numéro de groupe Protocole de tiques nymphales appliquées aux souris Nombre de larves nourries et nourries dans le lysat SCID Culture d’organes et résultat de la PCR EM A- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG EM PTx B- N / A NGC Élevé C C- N / A NGA Élevé C C- N / A NGA Élevé C C- N / A NGA Élevé C C- N / A NEG Élevé C C- N / A Nég. Élevé C C- N / A Nég. Élevé C C- N / A Nég. Élevé C C- N / D NGA Élevé C C- N / D Nég. PTLDS D- N / A NEG PTLDS DR N / A NEG PTLDS D- N / A NEG PTLDS D- N / A NGA PTLDS D- N / A NGA PTLDS D- N / A NGA PTLDS D- N / A NGA PTLDS D- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A Groupe NEG Protocole N ° de tiques Nymphaires Appliquées à des souris Nbre de Fed et Larves partiellement nourries utilisées dans le SCID lysat Culture de l’organe et résultat de la PCR EM A- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG EM PTx B- N / A NEG Élevé C C- N / A NEG Élevé C C- N / A NGC Élevé C C- N / A NGA Élevé C C- N / A NGA Élevé C C- N / A NGA Élevé C N- N / A NGA Élevé C N N NGA Élevé C C- N / A NEG Élevé C C- N / D NEG PTLDS D- N / A NÉP PTLDS DR N / A NÉP PTLDS D- N / D NÉP PTLDS D- N / D NÉP PTLDS D- N / A NEG PTLDS D- N / A NEG PTLDS D- N / A NEG PTLDS D- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG HV E- N / A NEG Abréviations: EM, érythème migrant; EM PTx, les patients après avoir terminé l’antibiothérapie pour l’érythème migrant; C élevé, sujets avec des taux sériques d’anticorps C constamment élevés; HV, bénévole en bonne santé; N / A, non applicable; NEG, négatif; PCR, amplification en chaîne par polymérase; PTLDS, syndrome post-traitement de la maladie de Lyme; R, répéter la procédure de xénodiagnostic; SCID, immunodéficience combinée sévèreView LargeResults du sujet A-, EM sur la thérapie, ont été considérés positifs par IA / PCR / ESI-MS sur des spécimens séparés: d’une seule tique et d’un pool de tiques La tique unique était positive pour des paires d’amorces, avec la paire d’amorces BCT produisant des amplicons de Borrelia, indiquant que cette tique contenait un mélange de génotypes B burgdorferi Le spécimen regroupé testé était positif avec des paires d’amorces et les signatures de comptage de base détectées correspondaient aux signatures trouvées dans la seule tique. La biopsie cutanée était négative par culture et culture PCR Ce participant achevait le quatrième jour d’antibiothérapie lors de la collecte des tiques et de la biopsie cutanée. Cet individu a répété la procédure de xénodiagnostic plusieurs mois après la fin de l’antibiothérapie. , et le test IA / PCR / ESI-MS des tiques récupérées était négatif. Le sujet du tableau 1 avec PTLDS D- a été considéré positit ive dans des procédures de xénodiagnostic séparées Les tiques récupérées de la procédure xénodiagnostique initiale ont été testées en utilisant le protocole Une nymphe a été trouvée positive par PCR de la culture lysat nymphe, mais la PCR directe du lysat nymphe et l’évaluation microscopique de la culture étaient négatives. négatifs dans tous les tests Tous les tissus de la souris SCID sur lesquels les nymphes ont été nourries étaient négatifs, y compris la nymphe associée au test PCR positif La biopsie cutanée du patient, réalisée au site d’alimentation des tiques, était négative par culture et culture PCR ospA positive de la culture de tiques a été confirmée par PCR pour d’autres gènes B burgdorferi PCR pour flaB, ospC, et un second jeu d’amorces pour ospA étaient positifs, mais recA PCR était négatif L’ADN extrait de cet échantillon de culture a ensuite été testé par IA / PCR / ESI-MS, qui était positive pour les paires d’amorces du test Elle a identifié l’ADN à partir d’un nouveau génotype de B burgdorferi, en raison de sa combinaison unique n de signatures de base Toutes les souches de B burgdorferi utilisées dans le laboratoire de l’Université Tufts ont été caractérisées par le test IA / PCR / ESI-MS et aucune des souches ne correspondait à ce génotype, ce qui rendait improbable le Xenodiagnostic Environ mois après la procédure originale Les tests directs par IA / PCR / ESI-MS ont révélé que la tique était positive pour B burgdorferi, par détection de paires d’amorces d’essai. Les signatures de comptage de base étaient cohérentes avec le génotype précédemment trouvé. PCR et culture et était négatif Les échantillons répétés de biopsie cutanée du patient étaient négatifs par culture et culture PCR

Tests de biopsie cutanée

Vingt-neuf échantillons ont été négatifs par culture et culture PCR Tous les participants, sauf les participants, ont subi des biopsies cutanées au site d’alimentation du tique. Les biopsies des participants ont donné des résultats positifs au test xénodiagnostique. cas ont été testés directement par IA / PCR / ESI-MS et ont été négatifs

DISCUSSION

Les principaux objectifs de cette étude étaient de développer des procédures pour le test xénodiagnostique des patients atteints de la maladie de Lyme et de déterminer l’innocuité du xénodiagnostic chez les humains. Nous avons démontré que les tiques larvaires peuvent être appliquées aux humains en toute sécurité. Les résultats initiaux montrent que la majorité des patients atteints de la maladie de Lyme traités par antibiothérapie sont négatifs par le xénodiagnostic. Une mise en garde importante est que le nombre de tiques xénodiagnostiques testées par participant en général était faible, en particulier chez les sujets précoces. Les tiques engorgées testées pour chaque individu sont susceptibles d’être une variable importante. Plus les tiques sont engorgées, plus la probabilité de détecter un positif est élevée. Cependant, notre test des tiques incluait des modalités multiples et des tests très sensibles ciblant B burgdorferi. B burgdorferi ADN dans les tiques xénodiagnostiques retirés de Une personne avait une EM et venait de commencer une antibiothérapie. Le but de l’évaluation de ce participant était d’inclure un éventuel «contrôle positif» pour la procédure de xénodiagnostic chez l’humain. Bien que les meilleurs contrôles positifs seraient les individus avec un EM non traité, nous pensons qu’il La deuxième personne était un patient atteint de PTLDS, qui avait détecté l’ADN de B burgdorferi lors de différentes procédures de xénodiagnostic, à des mois d’intervalle. Nous étions incapables d’interrompre le traitement. pour la culture de l’organisme ou pour montrer la transmission aux souris SCID Toutes nos détections positives étaient seulement par des techniques d’amplification de l’ADN Bien que ceci soit cohérent avec les études animales de xénodiagnostic après antibiotiques , où la positivité évaluée par PCR est très faible et non associée à une pathologie identifiable chez l’animal, elle pose la question de savoir si L’inoculation de B burgdorferi Dans les études où l’infection à B burgdorferi a été introduite chez des souris en utilisant des spirochètes en culture, un xénodiagnostic effectué après un traitement antibiotique a suggéré que les spirochètes étaient détectables. étaient viables, car les tiques pouvaient transmettre l’infection aux souris SCID Cependant, la transmission a échoué dans d’autres études sur des souris dans lesquelles l’infection a été introduite en utilisant des tiques, ce qui modélise plus étroitement l’acquisition humaine de la maladie de Lyme. Si une motilité active était requise pour l’acquisition de B burgdorferi par les tiques, un test de xénodiagnostic positif impliquerait la viabilité. Dans le « contrôle positif », les spirochètes viables auraient pu être détruits ou inhibés par des antibiotiques dans la peau et dans le sang. et le liquide interstitiel ingéré par la tique pendant sa période d’alimentation journalière Cependant, une hypothèse alternative est Borrelia burgdorferi n’a pas été trouvé dans les biopsies cutanées aux sites d’alimentation des tiques, mais la majorité des échantillons ont été testés en utilisant des tests de culture IA / PCR / ESI-MS de biopsies cutanées supplémentaires qui pourraient aider à clarifier si l’ADN spirochétal peut également être détecté directement dans la peau Une étude des patients atteints d’arthrite de Lyme a montré que l’ADN de B burgdorferi peut persister dans le liquide synovial et peut ne pas être un marqueur de la viabilité des bactéries. Nombre de patients pour lesquels un xénodiagnostic a été tenté Cependant, la majorité des patients étudiés étaient ceux présentant des symptômes résiduels non spécifiques et une séropositivité persistante, groupe le plus intéressant pour la question de savoir s’il pourrait y avoir une infection résiduelle avec B burgdorferi. de la nature du recrutement des patients, suivi de la conformité à l’antibiothérapie pour l’épisode antérieur de la maladie de Lyme ou la documentation de l’adéquation des taux sanguins des antibiotiques prescrits n’a pas été effectuée. Nous ne pouvons pas exclure la possibilité de réinfections subcliniques non traitées qui pourraient avoir eu lieu après l’achèvement du dernier cycle connu de traitement antibiotique; Cependant, il convient de noter que les patients actuellement ré-infectés manqueraient aux tests actuellement disponibles. Cette étude établit que le xénodiagnostic peut être utilisé en toute sécurité chez les patients atteints de la maladie de Lyme et pourrait améliorer notre connaissance de la biologie de Borrelia chez l’homme. l’incidence des résultats positifs au xénodiagnostic de B burgdorferi après un traitement antibiotique, si ces résultats représentent des organismes viables ou des restes d’infection, et si ces résultats peuvent être liés aux symptômes en cours chez les patients après le traitement de la maladie de Lyme

Remarques

Remerciements Nous remercions les participants à l’étude pour leur engagement enthousiaste; le moniteur médical indépendant Fred Gill, MD Centre clinique, National Institutes of Health [NIH]; le personnel de la Direction de la conformité à la réglementation et de la protection des sujets humains à l’Institut national des allergies et des maladies infectieuses (NIAID); Karen Sweeney, infirmière autorisée; Kelly Cahill, inf. Barry Eagel, MD; Leah Giambarresi, MS; Lisa Hoopengardner, ADRC; et Joy Beeler, MPH; Judith Starling, RPh NIH Clinical Centre Pharmacie; Heidi K Goethert, Université ScD Tufts; Rachel Fulton, inf. Meghan Gardiner Mansfield Médecine familiale; et Robert Kalish, MD Centre médical Tufts pour leur aide pendant l’étudeDisclaimer Les sources de financement ou Abbott n’a eu aucun rôle dans la collecte de données, l’analyse ou l’interprétation; la rédaction de rapports; ou soumission Tous les auteurs étaient responsables de la décision finale de soumission à la publication. Ibis Biosciences / Abbott n’a eu aucun rôle dans la conception ou l’interprétation de ces études. Les essais décrits sont pour la recherche uniquement. Soutien financier Cette recherche a été soutenue par le Programme de Recherche Intramural du NIH. NIAID AM, SPT, CW, PW, le programme NIH Bench to Bedside AM, LTH, et le numéro de subvention du NIAID RAI à LTH Ce travail a également été partiellement soutenu par le numéro de subvention NII RAI à MWE, CDC, HEC et Gordon et Llura Gund Foundation à PJ Conflits d’intérêts KPotential MWE, CDC et HEC sont des employés d’Ibis Biosciences, une société Abbott, qui a développé les tests et les instruments PCR / ESI-MS et IA / PCR / ESI-MS utilisés dans ces études. honoraires de consultation d’Immunetics et est un actionnaire d’Abbott Tous les autres auteurs ne signalent aucun conflit potentiel Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels C les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués