Résultats épidémiologiques et immunologiques de la forme subclinique de l’infection à Leishmania braziliensis

Les résultats épidémiologiques et immunologiques chez les sujets atteints d’une infection subclinique de Leishmania braziliensis ont été comparés à ceux des patients atteints de leishmaniose cutanée CL du même domaine d’endémicité. Les sujets ont eu un résultat positif au test cutané de leishmania et sont restés asymptomatiques pendant les prochaines années. ont une infection subclinique Les patients atteints de LC étaient plus jeunes, avaient des indurations de plus grand diamètre après les tests cutanés et étaient plus susceptibles d’avoir des marqueurs sérologiques positifs que ceux ayant une infection subclinique P & lt; Chez les sujets présentant une infection subclinique, les taux d’interféron-γ et de facteur de nécrose tumorale-α dans les surnageants de lymphocytes étaient inférieurs à ceux observés chez les patients atteints de CL P & lt; ; cependant, les taux moyens d’interleukine étaient légèrement plus élevés chez les patients atteints d’une infection subclinique que chez les patients atteints de LC. Ces données indiquent que, contrairement aux patients atteints de LC, les personnes infectées par L braziliensis peuvent moduler leur réponse immunitaire.

La manifestation clinique typique de la leishmaniose cutanée américaine CL est une lésion ulcérée unique avec des limites élevées, fréquemment situées sur les membres inférieurs Les facteurs parasitaires et hôtes sont liés aux formes cliniques de la leishmaniose [,, -] La réponse immunologique chez les patients La CL est caractérisée par une forte réponse immunitaire cellulaire avec une réaction d’hypersensibilité de type retardé à l’antigène de leishmania; la prolifération lymphocytaire; et une production élevée d’IFN-γ, la principale cytokine qui active les macrophages pour tuer les organismes Leishmania [,, -] Une infection subclinique à Leishmania a été rapportée dans des régions où Leishmania chagasi, l’agent causal de la leishmaniose viscérale, est endémique. la leishmaniose viscérale, qui ne produit pas d’IFN-γ stimulé par l’antigène leishmanien, les sujets atteints d’une infection subclinique à L chagasi démontrent une réponse lymphocytaire à l’antigène parasitaire Bien qu’aucune étude antérieure n’ait été conçue pour évaluer la prévalence de l’infection subclinique à Leishmania braziliensis, a été rapporté que ~% de sujets sains ont un résultat positif d’un test cutané pour l’antigène leishmania dans les zones où L braziliensis est endémique La présente étude a été réalisée à Canoa, un village rural situé dans l’État de Bahia, Brésil, où une flambée de CL est survenue au cours – Au cours de cette période, l’ensemble de la population du village a été évalué pour l’infection à Leishmania A Une étude épidémiologique a été réalisée chaque année pour déterminer la fréquence de la maladie et la fréquence des résultats positifs sans intradermique. Dans cette étude, nous avons évalué les aspects épidémiologiques de cette épidémie et comparé la réponse immunologique des patients atteints réponse observée chez les sujets atteints d’une infection subclinique de L braziliensis Les résultats cliniques pour les cas de CL détectés dans la région au cours de la période d’étude ont été décrits ailleurs

Patients et méthodes

Zone d’endémicité et sélection des sujets Cette étude a été réalisée dans le village de Canoa, municipalité de Santo Amaro, Bahia, Brésil Santo Amaro se trouve km au nord de Salvador, la capitale de l’État de Bahia, à la latitude sud, ° ‘ longitude ouest; le village se trouve au-dessus du niveau de la mer. La température moyenne annuelle est de ° C. Le village de Canoa a des maisons réparties le long d’une route pour km; il est situé entre les rivières Subaé et Traripe La végétation prédominante est les bananiers et les arbres à fleurs qui poussent autour des maisons Il y a de l’électricité mais pas d’eau courante Le village est divisé en zones: la zone de la maison est appelée « Canoa de Cima » Le quartier de Canoa « , et la zone de la maison est appelée » Canoa de Baixo «  » centre-ville de Canoa « Autour du village est une zone résiduelle de la forêt atlantique avec de vastes zones de dévastation ancienne et nouvelle, qui prédominent dans la deuxième zone » centre-ville  » En mars, une épidémie de CL s’est déclarée dans le village. Il n’y avait aucune information sur des cas de LLC et aucun cas de maladie de Chagas ou de schistosomiase n’a été signalé dans la région, bien que le paludisme ait été signalé des années avant le début de la leishmaniose. Au cours de la première année de l’étude, une enquête épidémiologique a été réalisée, ainsi que des évaluations cliniques et de laboratoire, des tests cutanés et des tests sérologiques pour la leishmania. Un consentement éclairé a été obtenu des patients ou de leurs tuteurs, et les directives pour l’expérimentation humaine de l’Université Fédérale de Bahia ont été suivies dans la conduite de cette recherche clinique. Au cours de cette année, un total d’habitants ont été évalués. la maladie Chaque année, nous avons réalisé une évaluation clinique et un test cutané avec l’antigène leishmania pour tous les individus sains, afin de déterminer la proportion de patients ayant subi une conversion cutanée intradermique et leurs résultats cliniques. qui restait asymptomatique au cours des prochaines années était considéré comme ayant une infection infraclinique à L braziliensis. Test cutané intradermique et réactions sérologiques Un test d’hypersensibilité de type retardé a été réalisé avec un antigène soluble de leishmania préparé comme décrit ailleurs L’antigène soluble de Leishmania amazonensis a également été utilisé effectuer un test ELISA pour détecter antibo Études immunologiques Les réponses lymphocytaires prolifératives et les taux de cytokine ont été mesurés dans des échantillons de cellules mononucléées du sang périphérique PBMC provenant de sujets atteints d’une infection subclinique et de patients atteints de CL avant le début du traitement. Les patients atteints d’une infection subclinique ont été recrutés Les PBMC ont été ajustées à une concentration de 1 cellules / mL dans du RPMI Gibco contenant de la pénicilline et de la streptomycine et complétées par% AB. Sérum humain normal Des aliquotes de × cellules en mL de RPMI ont été cultivées en triple dans des plaques de microtitration à fond plat Linbro Chemical et stimulées avec du lysat de L amazonensis soluble μg / mL ou PWM « pokeweed » dans une dilution finale de: mesurée par le taux d’absorption de [H] thymidine après des jours d’incubation Les résultats ont été exprimés comme un indice de stimulation, qui a été déterminé en divisant les comptes par minute cpm pour les cellules stimulées en culture par le cpm pour les cellules non stimulées Les niveaux d’IFN-γ, TNF-α et IL- ont été déterminés dans les cultures de surnageant PBMC par la technique sandwich ELISA Analyse statistique Les données ont été stockées dans le programme Epi-Info, version Centers for Disease Control and Prevention Le test t de Student, le test χ et le test U de Mann-Whitney ont été utilisés pour comparer les résultats pour les groupes, les sujets avec infection subclinique vs sujets avec test de CL Spearman ont été utilisés pour corréler les résultats des tests de production de cytokines et des tests cutanés Les différences ont été considérées comme statistiquement significatives si la probabilité d’une erreur de type I était & lt;

Résultats

L’âge moyen ± SD de la population de Canoa était de ± ans; % des sujets étaient & lt; ans Deux cent quatre-vingt-trois sujets% étaient des hommes, et% étaient des femmes Le nombre de résidents dans le centre-ville de Canoa était% de la population étudiée Les données de l’enquête annuelle sont présentées dans le tableau Au cours de la première année, avaient une CL active et avaient des antécédents de lésions cutanées avec une cicatrice typique de maladie cutanée. Ces personnes ont eu des résultats positifs au test cutané et ont nié avoir reçu une quelconque thérapie; ces résultats ont été pris pour indiquer une infection auto-cicatrisante Parmi les sujets asymptomatiques évalués,% ont eu un résultat négatif au test cutané et% ont eu un résultat positif

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients dans une étude prospective sur l’infection à Leishmania braziliensis et la leishmaniose cutanée à Canoa, Santo Amaro, Bahia, Brésil, -Table View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients dans une étude prospective d’infection à Leishmania braziliensis et de leishmaniose cutanée à Canoa, Santo Amaro Au cours de la deuxième année de l’étude, d’autres cas de CL ont été diagnostiqués et des sujets précédemment asymptomatiques ont été évalués. Dans cette seconde évaluation, les sujets dont le résultat du premier test cutané était négatif ont été convertis en résultat positif. de l’étude, des sujets sains ayant déjà eu des résultats négatifs au test cutané ont été réévalués et% convertis en résultat positif. Aucun cas de CL n’a été observé au cours de la troisième année de l’étude. Cette zone continue d’être surveillée cliniquement; Parmi les sujets sains qui ont eu des résultats positifs au test cutané tout au long de l’étude, aucun n’a développé de CL. Tous les patients atteints de maladie active ont été traités par antimoine standard et, après des années de suivi, aucun n’a présenté de rechute. Les patients atteints d’une maladie cutanée étaient plus jeunes, présentaient des indurations de plus grand diamètre après un test cutané et présentaient une proportion plus élevée de résultats positifs aux tests sérologiques que les sujets ayant une infection subclinique L braziliensis. les personnes ayant une infection subclinique Il y avait aussi une différence significative entre les personnes résidant dans le centre de Canoa et celles résidant dans le centre de Canoa:% de patients atteints de LC venaient du centre de Canoa, mais moins de la moitié des sujets subcliniques vécu dans cette partie du village P & lt; Plusieurs variables socio-économiques, telles que la profession, le type de maison et les conditions d’hygiène, ont été évaluées, et aucune différence significative n’a été documentée en ce qui concerne ces variables entre les parties du village.

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques épidémiologiques et les résultats de laboratoire pour les personnes atteintes d’une infection à Leishmania braziliensis et la leishmaniose cutanée à Canoa, Santo Amaro, Bahia, Brésil, -Table View largeTélécharger diapositives Caractéristiques épidémiologiques et les résultats de laboratoire pour les personnes atteintes de Leishmania braziliensis à Canoa, Santo Amaro La réponse proliférative lymphocytaire à l’antigène leishmania a été évaluée chez des sujets atteints d’une infection subclinique de L braziliensis, chez des patients atteints de LC et chez des sujets sains qui n’ont pas été exposés à des organismes Leishmania. L’indice de stimulation moyen ± écart-type chez les sujets atteints d’une infection subclinique était plus élevé que chez les sujets sains qui n’étaient pas exposés o Organismes de Leishmania ± vs ±; P & lt; et inférieur à celui des patients avec CL ±; P & lt; La figure montre les niveaux d’IFN-γ, TNF-α et IL- dans le surnageant de cultures lymphocytaires de sujets atteints d’une infection subclinique L braziliensis et de patients atteints de CL Les niveaux moyens ± SD d’IFN-γ et TNF-α parmi les sujets subcliniques L Ces valeurs étaient inférieures à celles observées chez les patients atteints de CL. Les taux d’IFN-γ et de TNF-α chez les patients atteints de LC étaient inférieurs à ceux des patients atteints de CL. étaient de ± pg / mL, – pg / mL et ± pg / mL, – pg / mL, respectivement P & lt; Il y avait une corrélation directe entre les niveaux d’IFN-γ et les diamètres d’indurations après un test cutané chez des sujets présentant une infection subclinique de L braziliensis rs =; P & lt;

Figure View largeTélécharger les niveaux de cytokine dans les surnageants des cultures lymphocytaires des individus atteints d’une infection subclinique Leishmania braziliensis et chez les patients atteints de leishmaniose cutanée Lignes horizontales, valeurs moyennesFigure de largeTéléchargement des niveaux de cytokine dans les surnageants de cultures lymphocytaires d’individus atteints d’une infection subclinique Leishmania braziliensis et patients atteints de leishmaniose cutanée Lignes horizontales, valeurs moyennes Les deux groupes présentaient de faibles niveaux de production d’IL- dans les surnageants des cultures lymphocytaires. Le niveau moyen d’IL- chez les sujets présentant une infection subclinique L braziliensis ± pg / mL [plage, – pg / mL] était légèrement supérieure à celle observée chez les patients avec CL ± pg / mL [intervalle, – pg / mL] Cette différence n’était pas statistiquement significative P & gt;

Discussion

Le test de peau intradermique leishmania a été utilisé pour diagnostiquer CL pour & gt; Ce test a une grande sensibilité et spécificité et une bonne valeur prédictive positive, ce qui le rend très utile pour les études épidémiologiques et cliniques [,,] L’utilisation de différentes espèces du parasite et différentes formes de préparation antigénique et la capacité du test à induire une réaction d’hypersensibilité de type retardée lorsqu’elle est effectuée une seconde fois avec seulement un court intervalle entre les tests indique la nécessité de standardiser le test cutané de leishmania Dans la présente étude, nous avons utilisé un antigène soluble de L amazonensis , et le test a été répétée après l’année Une étude précédente a montré qu’aucun patient n’avait de résultat de test de leishmania cutané lorsque le test était répété après un intervalle d’année Dans la zone d’endémicité de Canoa, des individus avec un test cutané négatif à l’antigène leishmania réaction intradermique positive après un second test cutané au cours des années de suivi Par conséquent, nous supposons que la conversion du résultat du test pour les patients asymptomatiques s liés à l’exposition à l’infection par Leishmania sans développement de la maladie On ne peut exclure la possibilité que certains de ces individus développent une ou plusieurs petites lésions non reconnues comme CL. Cependant, aucun des sujets ne présentait l’ulcère classique typique de CL. infection subclinique L braziliensis dans la présente étude est similaire au pourcentage de personnes avec un résultat positif au test cutané rapporté dans des études transversales [,,,] Les facteurs environnementaux, parasitaires et hôtes peuvent expliquer l’apparition de la maladie dans un petit Pourcentage de sujets infectés A Canoa, l’espèce Leishmania isolée était L braziliensis, et le vecteur phlébotomique était Lutzomyia intermedia Il a été suggéré que différentes espèces apparentées de Leishmania longipalpis diffèrent par leur propension à moduler la pathologie de la maladie transmise est également bien connu qu’une seule espèce de Leishmania, telle que L amazonensis, peut causer toute la gamme de Les facteurs de l’hôte sont également impliqués dans la détermination du spectre clinique de la leishmaniose Bien que les patients avec une réponse T évidente contre l’antigène parasitaire développent une maladie cutanée simple , des patients avec une réponse immunitaire altérée développer une CL diffuse L’une des découvertes importantes concernant le rôle de l’environnement dans le développement de la CL est que la majorité des cas de LC se sont produits chez des résidents du centre de Canoa, une zone où une forte dévastation de forêt a été observée. l’infection a été répartie également dans les deux parties du village, il est possible que des facteurs tels que le degré d’exposition et la charge parasitaire expliquent la survenue de ces différentes formes cliniques d’infection considérant que L braziliensis était le seul agent causal isolé des vecteur L intermedia est associée à l’infection L braziliensis, il est peu probable que d’autres Leishm La réponse immunitaire chez les patients atteints de LC est caractérisée par une forte production d’IFN-γ et de TNF-α avec l’expression de l’oxyde nitrique, qui a été démontrée dans des biopsies pour les patients avec CL Bien que ces cytokines sont importantes dans le contrôle de l’infection leishmania, les patients développent des ulcères cutanés caractérisés par une réaction inflammatoire intense avec peu ou pas de parasites au site de l’ulcération Par conséquent, il est possible de ces cytokines peuvent être dangereuses pour l’hôte Des études récentes ont montré que IL- module la réponse immunitaire chez les patients atteints de CL et que l’inhibition de la production de TNF-α peut améliorer la réponse thérapeutique chez les patients atteints de leishmaniose muqueuse. n’ont pas été mesurés dans la présente étude. Nous avons trouvé que les sujets atteints d’une infection subclinique à L brésiliens avaient des taux d’IFN-γ et de TNF-α plus faibles. Comparativement aux patients atteints de LC, les sujets n’ayant pas développé de maladie peuvent avoir la capacité de moduler leur réponse immunitaire. La production d’IFN-γ et de TNF-α a été observée chez des sujets atteints de LLC subclinique. l’infection est suffisante pour contrôler la croissance des parasites et n’entraîne pas de dommages aux tissus

Remerciements

Nous remercions le Dr Warren D Johnson pour les commentaires critiques, Lay Har Cheng pour l’examen du manuscrit, et Elbe Silva pour la préparation du manuscrit