Insuffisance de la moelle osseuse associée à une infection par un herpèsvirus chez un patient subissant une greffe de cellules souches sanguines périphériques autologues

Nous décrivons un cas mortel d’insuffisance de moelle osseuse associée à l’herpèsvirus humain chez un patient ayant reçu un traitement intense pour lymphome hodgkinien et subissant une greffe de moelle osseuse. L’insuffisance médullaire osseuse était résistante au traitement antiviral et une seconde infusion de cellules souches autologues. être une préoccupation majeure chez les receveurs de greffe dans un état critique

Il est bien connu que l’immunosuppression iatrogène entraîne la réactivation des infections virales latentes, telles que le cytomégalovirus humain hCMV, le virus Epstein-Barr EBV et les herpèsvirus humains HHV- infections Plus récemment, herpèsvirus associé au sarcome de Kaposi, également connu sous le nom de « herpesvirus humain ». type, « a été identifié HHV- n’est pas omniprésent dans la population générale; Les taux de séroprévalence sont très faibles au Royaume-Uni et aux États-Unis et ne sont supérieurs que dans certaines zones géographiques du monde méditerranéen et africain Dans une étude,% et% des donneurs de sang italiens avaient des anticorps contre l’antigène nucléaire associé à la latence En outre, HHV- est souvent sécrété dans la salive, ce qui suggère que la salive est probablement le principal véhicule de transmission L’augmentation de la prévalence de la séropositivité à l’HHV. La transmission du HHV résulte d’une transplantation d’organe et d’une utilisation de drogues par voie intraveineuse. Les transplantés de moelle osseuse chez les receveurs de BMT pourraient être à risque de contracter le VHC. – infection Cependant, on sait peu de choses sur les facteurs de risque de la maladie post-transplantaire HHV-, et l’association entre HHV- et le retard de la prise de greffe reste t o être élucidé pour différents types de transplantations A ce jour, seuls quelques rapports ont été publiés sur l’infection à HHV confirmée microbiologiquement chez les greffés Nous décrivons un cas d’aplasie post-greffe de moelle osseuse post-transplantation fatale associée à une infection à HHV chez un patient atteint de lymphome de Hodgkin. Au mois de mars, une fillette ayant reçu un diagnostic de lymphome hodgkinien de stade III, sous-type nodulaire, a été adressée au Centre de greffe de moelle osseuse. Azienda Ospedaliera Bianchi-Melacrino-Morelli, Reggio de Calabre, Italie Le lymphome du patient était résistant aux cycles Par conséquent, elle a reçu des cycles d’un régime comprenant séquentiellement de la méchloréthamine en mg / m, de la lomustine en mg / m, de la vindésine en mg / m, de la prednisone. mg / m, épirubicine mg / m, vincristine mg / m, procarbazine mg / m, vinblastine mg / m, et bléomycine mg / mA après le deuxième cycle de la deuxième chimiothérapie, granulocyte co En raison d’une embolie pulmonaire, un traitement anticoagulant a également été commencé galactorrhée. En septembre, après une première réponse partielle, le patient a présenté une progression de la maladie dans les ganglions lymphatiques et les poumons. l’examen d’un échantillon de biopsie de moelle osseuse a montré une infiltration de la maladie. Sur la base de ces données cliniques, il a été décidé de commencer une chimiothérapie de troisième ligne comportant des cycles de doxorubicine mg / m, de bléomycine mg / m, de vinblastine mg / m et dacarbazine mg / m suivi d’une thérapie séquentielle à forte dose Le patient a subi une seconde mobilisation de cellules souches et des cellules souches du sang périphérique CD / kg ont été collectées à nouveau Après des mois, le patient a reçu un traitement de conditionnement avec mitoxantrone mg / m et melphalan m, suivi d’un prélèvement autologue de cellules souches du sang périphérique × cellules CD / kg Traitement prophylactique antimicrobien avec ciprofloxacine mg bid, solution orale d’itraconazole en mg / kg bid, et acyclovir mg / kg tid a également été administré. Le patient a été libéré le lendemain de la transplantation. Peu de temps après, le patient présentait une éruption cutanée, de la fièvre et une leucopénie. Les résultats des tests des anticorps dirigés contre les virus de l’hépatite A, B et C étaient négatifs Résultats des tests des antigènes CMV, EBV et HHV et des ARNm HHV-ADN et CMV Cependant, l’ADN-HHV était clairement documenté dans les fractions acellulaires et cellulaires du sang périphérique et de la moelle osseuse. De plus, l’ARNm du HHV a été détecté dans les cellules mononucléaires de la moelle osseuse. En raison de l’absence progressive de cellularité médullaire, × autologue Des cellules CD / kg ont été perfusées. De plus, des facteurs de croissance hématopoïétiques ont été administrés, ainsi que des stéroïdes. Les transfusions de plaquettes et de nalement, un traitement antiviral différent a été tenté foscarnet, mg / kg bid

Tableau View largeTélécharger des pathogènes viraux détectés pendant la phase leucopénique après une greffe de cellules souches du sang périphériqueTable View largeTélécharger des pathogènes viraux détectés pendant la phase leucopénique après une greffe de cellules souches du sang périphérique

Figure: Vue détailléeDétection de l’ADN de l’herpèsvirus humain dans les fractions acellulaires et cellulaires du sang périphérique ou de la moelle osseuse Voie, marqueur de poids moléculaire φX ADN / Inf I; voie, analyse par PCR de PBMC positives pour la trame de lecture ouverte ORF K ADN avant la transplantation de cellules souches du sang périphérique PBSCT; voie, sérum négatif pour l’ADN de l’ORF K avant PBSCT; voies et, PBMC et sérum, respectivement, tous deux positifs pour l’ADN de l’ORF K après PBSCT; des pistes et des cellules mononucléaires de la moelle osseuse et du sérum, respectivement, positives pour l’ADN de l’ORF K après PBSCT; voie, mélanger PCR sans DNAFigure Voir grandDownload slideDétection de l’ADN de l’herpèsvirus humain dans les fractions acellulaires et cellulaires du sang périphérique ou de la moelle osseuse Lane, marqueur de poids moléculaire φX DNA / Inf I; voie, analyse par PCR de PBMC positives pour la trame de lecture ouverte ORF K ADN avant la transplantation de cellules souches du sang périphérique PBSCT; voie, sérum négatif pour l’ADN de l’ORF K avant PBSCT; voies et, PBMC et sérum, respectivement, tous deux positifs pour l’ADN de l’ORF K après PBSCT; des pistes et des cellules mononucléaires de la moelle osseuse et du sérum, respectivement, positives pour l’ADN de l’ORF K après PBSCT; voie, mélanger PCR sans ADN

La survenue d’infections primaires ou réactivées par l’herpèsvirus humain chez les transplantés est associée à un traitement immunosuppresseur et entraîne des complications graves et néfastes. Les infections virales concomitantes multiples peuvent également favoriser la propagation du cycle lytique des pathogènes infectieux émergents, tels que le HHV-herpesvirus. L’analyse de la séquence génomique montre que l’herpèsvirus saimiri et le singe rhésus rhadinovirus sont étroitement apparentés. Les caractéristiques biologiques de ce virus sont très intéressantes pour son rôle pathogène potentiel dans les maladies neurologiques et lymphoprolifératives Des études antérieures ont montré que le HHV- peut jouer un rôle dans la prolifération cellulaire plasmatique de la moelle osseuse et / ou la transformation néoplasique chez les patients atteints de myélome multiple, ce qui suggère que l’agent viral peut être très important dans le développement de cette malignité des cellules B Cependant, le même microorganisme peut rôle pathogène variable chez les malins et les non malgiens L’infection primaire par une réactivation du HHV ou du HHV peut être associée à différents événements pathologiques survenant après la transplantation L’infection par le HHV provoque un syndrome viral caractérisé par de la fièvre, une splénomégalie et une activité myélosuppressive dans les deux organes. Chez les receveurs de greffe, la réactivation transitoire de HHV- est associée à de la fièvre, des éruptions cutanées et une hépatite. Ces caractéristiques cliniques sont similaires à celles des infections provoquées par d’autres membres de la famille des herpèsvirus, tels que HHV- et hCMV. Nous avons tenté de lier les signes cliniques et hématologiques chez notre patient, tels que les éruptions cutanées, la fièvre et la suppression de la moelle osseuse, aux résultats des examens de laboratoire et moléculaires dans lesquels des tests ont été effectués. plusieurs groupes d’herpèsvirus ont été étudiés en série, la moelle osseuse, le sang périphérique et les échantillons de sérum, dans le but de Les tests de réplication du hCMV, du EBV, du HHV ou du HHV actifs pour les antigènes hCMV, EBV et HHV, ainsi que les tests moléculaires pour l’ARNm du hCMV et l’ADN du HHV, ont eu des résultats négatifs pendant la période symptomatique. L’ADN a été détecté par PCR en une seule étape dans des cellules mononucléaires dans des échantillons de sang et de moelle osseuse. Pour examiner le cycle de vie du virus, nous avons recherché l’ARNm de la transcription du gène structurel HHV-K. Comme les résultats des tests de hCMV, EBV et HHV- étaient négatifs, nous avons conclu que HHV- était la cause la plus probable de la maladie de ce patient. Il faut souligner que les preuves doivent être soigneusement collectées avant la présence de les séquences d’acide nucléique microbien dans le sang sont corrélées avec une maladie infectieuse spécifique La détection de l’ADN HHV a été le pilier de la confirmation de la présence de ce virus dans les tissus. est particulièrement sujette à la contamination et à la production de résultats faussement positifs, nous avons décidé d’utiliser un test PCR en une seule étape pour détecter l’ADN HHV- Toutefois, la détection par PCR de séquences d’ADN spécifiques n’est pas capable de distinguer les stades latents et lytiques. le cycle de vie viralDémonstration de HHV-ARNm par RT-PCR, en particulier des transcrits de gènes structurels, semble offrir la réflexion la plus précise de la réplication virale. La détection des transcrits de gènes structuraux est indicative d’infection chronique persistante. HHV- sont principalement codés par ORF K, qui est présent dans la même position génomique que les glycoprotéines d’enveloppe de virions d’autres herpesvirus γ K s’est exprimé durant la réplication lytique de HHV dans des cellules de lymphome à cavité corporelle et a été localisé sur la surface des cellules et des virions Des études antérieures ont montré que les ARNm épissés sont transcrits à partir du locus K de HHV-Kα et Kβ, en sur un message non épissé Kγ Les amorces du kit Ampliquality HHV- reconnaissent un fragment supprimé par épissage du locus K, et, par conséquent, un fragment plus petit que ce qui devrait résulter de l’amplification de l’ADN du génome latent sera obtenu. assure la spécificité du fragment amplifié, même lorsque l’ADN viral est présent dans l’échantillon d’ARN, ce qui rend inutiles les procédures de contrôle de la qualité ou l’utilisation de DNase. Dans notre cas, les observations suggèrent que la virémie HHV a probablement été provoquée par une réactivation virale. infection primaire L’ADN et l’ARNm ont tous deux été trouvés dans des échantillons séquentiels obtenus au moment des symptômes cliniques et pendant la période posttransplantation. D’autre part, seul l’ADN HHV a été détecté dans le sang périphérique avant la transplantation et nous n’avons détecté aucune copie de l’ARNm. Malheureusement, il n’a pas été possible d’effectuer une analyse cinétique moléculaire quantitative de la charge de HHV, et seule l’analyse qualitative a été effectuée.

Figure Vue largeDownload de l’ADN de l’herpèsvirus humain dans les fractions cellulaires du sang périphérique et de la moelle osseuse avant et après la transplantation de cellules souches du sang périphérique PBSCT Lane, marqueur de faible poids moléculaire; voies et analyse par PCR de PBMC positives pour l’ADN de l’ORF K à cadre ouvert de lecture avant PBSCT; voies et analyse PCR des PBMC et des cellules mononucléaires de la moelle osseuse, respectivement, toutes deux positives pour l’ADN de l’ORF K après la première détection de PBSCT; voies et analyse par PCR des PBMC et des cellules mononucléaires de la moelle osseuse, respectivement, positives pour l’ADN de l’ORF K après la seconde détection de PBSCT; voie, mélanger PCR sans ADNFigure View largeDownload slideDétection de l’ADN de l’herpèsvirus humain dans les fractions cellulaires du sang périphérique et de la moelle osseuse avant et après la transplantation de cellules souches du sang périphérique PBSCT Lane, marqueur de bas poids moléculaire; voies et analyse par PCR de PBMC positives pour l’ADN de l’ORF K à cadre ouvert de lecture avant PBSCT; voies et analyse PCR des PBMC et des cellules mononucléaires de la moelle osseuse, respectivement, toutes deux positives pour l’ADN de l’ORF K après la première détection de PBSCT; voies et analyse par PCR des PBMC et des cellules mononucléaires de la moelle osseuse, respectivement, positives pour l’ADN de l’ORF K après la seconde détection de PBSCT; voie, mélanger PCR sans ADNA étude récente, dans laquelle un test PCR en temps réel a été utilisé, fourni des preuves à l’appui d’une forte corrélation entre les caractéristiques cliniques ingravescent et une forte charge HHV En outre, Quinlivan et al suggèrent que Le nombre de copies HHV, tel que déterminé par PCR quantitative-compétitive, doit être utilisé comme biomarqueur pendant le suivi clinique Notre rapport est en accord avec les observations d’autres groupes et confirme l’association entre l’insuffisance HHV et la moelle osseuse chez les patients ayant subi transplantation autologue La détection d’ARNm de transcrits de protéines lytiques, une méthode pour prouver une suspicion clinique, est un indicateur clair d’infection chronique et persistante; Cela confirme l’existence d’une relation forte et étroite entre la présence de cellules infectées actives et un résultat défavorable dans la maladie associée au HHV. En conclusion, une manifestation sévère de l’infection par le HHV peut entraîner une aplasie irréversible chez les sujets atteints de BMT. Les soins habituellement prodigués pour traiter d’autres agents pathogènes latents doivent être appliqués à la reconnaissance précoce et au traitement approprié du syndrome HHV. La surveillance de la charge HHV peut être utile comme étalon de référence pour mesurer le succès du traitement du HHV-