Épidémiologie conventionnelle et moléculaire de la résistance aux macrolides chez les nouveaux isolats complexes de Mycobacterium avium obtenus à partir de patients infectés par le VIH

Les antibiotiques macrolides clarithromycine et azithromycine ont amélioré le traitement et la prophylaxie de l’infection à MAC par Mycobacterium avium MAC Le succès a été quelque peu entravé par le développement de la résistance aux macrolides. La résistance initiale aux macrolides dans les infections à MAC associées au VIH a rarement été rapportée Les raisons potentielles de la résistance initiale aux macrolides comprennent la pression antibiotique sélective, la faible observance de la prophylaxie, la transmission à personne ou source environnementale commune Nous avons récemment noté une augmentation marquée de la résistance initiale aux macrolides chez les isolats de MAC associés au VIH et effectué une étude de cohorte rétrospective pour évaluer les facteurs associés. Denver Health Denver, CO est un système de santé publique intégré avec – Patients infectés par le VIH vus chaque année A Le laboratoire central traite tous les échantillons mycobactériens de Denver Health et les isolats MAC stériles ont été conservés comme décrit précédemment. Le test de sensibilité à la clarithromycine a été réalisé en utilisant la diffusion sur disque Le Colorado Multiple Institutional Review Board a approuvé cette étude. infections à MAC de site stérile associées survenues depuis Une étude de cohorte rétrospective a été réalisée pour identifier les facteurs associés à la résistance initiale des macrolides pendant la période de -, une période durant laquelle nous avons noté une résistance accrue Seul l’isolat initial récupéré de chaque patient était inclus Normalement stérile Le sang, les ganglions lymphatiques, la moelle osseuse, le foie, la rate et les abcèsNous avons examiné les dossiers médicaux, une base de données de laboratoire et une base de données de pharmacies Environ 100% des patients infectés par le VIH de Denver Health reçoivent leurs médicaments. dénombrements et charges de VIH au cours de l’année La reconstitution immunitaire a été définie comme l’isolement de MAC dans les mois suivant le début du traitement antirétroviral. L’utilisation de clarithromycine ou d’azithromycine pour le traitement ou la prophylaxie MAC ou pour le traitement d’autres infections a été évaluée à l’aide de la base de données de pharmacies. Le respect de la prophylaxie par MAC a été calculé sur la base des données de remplissage des pharmacies. L’utilisation de macrolides pour d’autres infections a été évaluée pour les années précédant les années précédentes. Diagnostic MAC L’analyse moléculaire a été réalisée sur des isolats résistants aux macrolides et sur des isolats témoins sélectionnés au hasard par isolat résistant aux macrolides. Des échantillons ont été cultivés sur un remblai H- bi-plaque Middlebrook / Mitchison à ° C au CO pendant une journée. et sous-cultivé dans du bouillon H et incubé à ° C dans COPFGE wa s effectué avec l’utilisation de l’ADN cellulaire entier, comme décrit ailleurs , avec les modifications suivantes: la digestion était avec XbaI, et les temps de commutation ont été augmentés linéairement sur h PCR avec l’enzyme haute fidélité AccuTaq; Sigma utilisant la petite sous-unité F ‘-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-‘ et la grande sous-unité R ‘-CCGGTCCTCTCGTACT-‘ amorces du gène ribosomal a été réalisée, suivie par le clonage dans Escherichia coli, comme décrit ailleurs , sauf que le temps d’extension PCR était min. Nous avons séquencé la fin de la région SADN S séquençage SADN a été réalisée pour évaluer les mutations ponctuelles codant pour la résistance aux macrolides Les chercheurs ont été aveuglés à la source de l’isolat MAC Des comparaisons de séquences ont été faites en recherchant l’outil de recherche d’alignement local basique Les analyses statistiques ont évalué les facteurs associés à une infection MAC résistante aux macrolides. Les variables ont été comparées à l’aide du test de Wilcoxon ou du test χ. L’analyse des données a été réalisée à l’aide du logiciel SAS, version SAS Institute DNA. les patrons de fragments générés par PFGE ont été comparés visuellement, et la parenté a été évaluée en utilisant les critères de Tenover et al Résultats Pendant la période de -, il y avait des isolats de MAC de site stérile associés au VIH récupérés à Denver Health chiffre Une augmentation du nombre absolu de cas a été observée de à, après quoi il y avait une diminution marquée De , il y avait des infections à MAC du site stérile associées au VIH Neuf% des isolats étaient résistants aux macrolides Le taux ou la résistance aux macrolides a augmenté de% avant à% en –

Figure Vue largeDownload slideNombre du site initial stérile Mycobacterium avium isolats MAC et taux de résistance initiale aux macrolides chez Denver Health Denver, COFigure View largeTélécharger slideNombre d’isolats MAC du complexe mycobacterium avium initial du site stérile et taux de résistance initiale aux macrolides chez Denver Health Denver, La comparaison entre l’ACO des patients et des patients sans MAC initialement résistants aux macrolides est présentée dans le tableau La seule variable démographique de base ou liée à la maladie liée à l’infection par un isolat MAC initialement résistant aux macrolides était le facteur de risque de transmission hétérosexuelle du VIH

L’utilisation de macrolides pour des indications non MAC n’était pas associée à une résistance Deux patients infectés par MAC initialement résistante aux macrolides avaient des antécédents limités ou inexistants d’utilisation de macrolides Un de ces patients a reçu un traitement d’un jour par azithromycine un mois auparavant. Dans les deux cas, les isolats de chaque paire ont été obtenus à quelques jours d’intervalle. Les isolats de la première paire étaient tous deux résistants à la clarithromycine, tandis que les isolats de la première paire étaient identiques. les isolats de la seconde paire étaient tous deux sensibles à la clarithromycine Un examen détaillé des données démographiques, sociales et d’hospitalisation n’a révélé aucun lien entre les patients dans les deux Séquences séquençage d’ADNr confirmé que tous les isolats testés étaient Mvium Neuf des isolats sensibles n’avaient pas de mutations de SADAD -, alors que des isolats résistants avaient des mutations à ces positions Deux des isolats résistants aux macrolides ne présentaient pas de mutations de l’ADN ribosomique à ces positions. Si ces patients présentaient des infections polyclonales, notre stratégie d’échantillonnage pour l’analyse de l’ADN sélection de colonie sans connaissance de sa susceptibilité macrolide pourrait être responsable de cette discordance apparente. Nous avons noté une augmentation substantielle de la résistance aux macrolides chez les cas qui continuent de se produire. La proportion d’isolats de MAC à site stérile ayant une résistance initiale aux macrolides a augmenté par rapport à la résistance initiale aux macrolides. % avant l’autorisation de la clarithromycine et l’azithromycine à% in – L’utilisation de macrolides avant le diagnostic était plus étroitement associée à MAC initialement macrolide-résistante Nous n’avons pas trouvé une association entre l’adhérence à la prophylaxie MAC et le développement de la résistance. transmission de personne à personne ou environnement commun source d’exposition ental Nos données soutiennent la théorie selon laquelle l’utilisation antérieure de macrolides reste le principal mécanisme de développement de la résistance aux macrolides dans l’infection MAC associée au VIH Le scénario le plus courant concernait des patients ayant une MAC auparavant traités par clarithromycine Le développement de la résistance aux macrolides pendant la prophylaxie par l’azithromycine a été estimé à% chez les patients dont la prophylaxie a échoué De même, nous avons constaté que% des patients atteints d’une MAC sévère étaient infectés par des isolats résistants aux macrolides. prophylaxie, comme cela a été suggéré dans des études antérieures Deux patients ayant eu une primo-infection par des isolats résistants aux macrolides avaient une exposition macrolide limitée ou nulle. Chez un troisième patient, l’administration d’un traitement prophylactique par azithromycine au développement de la résistance aux macrolides ici et précédemment, nous avons e ont rapporté des appariements occasionnels d’empreintes digitales PFGE dans des isolats de MAC associés au VIH; À notre connaissance, il n’existe pas d’information disponible sur la présence de la résistance aux macrolides dans les isolats MAC environnementaux. Les limites importantes de cette recherche sont la nature rétrospective de l’étude, le petit nombre de Les infections à MAC et le fait que ces données représentent une expérience institutionnelle unique Cependant, nos méthodes assurent une confirmation presque complète de l’infection MAC associée au VIH pendant la période d’étude, et les données de sensibilité à la clarithromycine étaient disponibles sur tous les isolats. Nous n’avons pas reçu de macrolides par une pharmacie externe avant le diagnostic d’AMC. Nous estimons que cela est peu probable compte tenu de notre examen détaillé des dossiers et de l’évaluation antérieure . l’impossibilité de relier les renouvellements d’ordonnances à l’utilisation des médicaments Enfin, notre examen Les liens épidémiologiques entre les patients présentant des empreintes digitales PFGE correspondantes ont été limités par la nature rétrospective de cette revue. Bien que le nombre d’infections à MAC ait diminué, le taux de résistance initiale aux macrolides a augmenté. Notre recherche sert de rappel pour les cliniciens. Dans notre établissement, nous effectuons des tests de sensibilité à la clarithromycine sur des isolats MAC de site stérile initial prélevés sur des patients infectés par le VIH. La méthode de diffusion sur disque pour la détermination de la sensibilité à la clarithromycine a été validée et pourrait servir de une méthode simple, efficace et peu coûteuse pour évaluer la sensibilité aux macrolides dans les isolats MAC associés au VIH Nous espérons que notre recherche encourage d’autres chercheurs à évaluer les taux de résistance aux macrolides dans les infections MAC associées au VIH dans d’autres contextes

Remerciements

Soutien financier Financement des National Institutes of Health pour le programme de formation en recherche sur le VIH de l’Université du Colorado T AI-PI: Schooley; aux conflits d’intérêt EMGPotentiel Tous les auteurs: pas de conflits